咨询热线:
  • 技术服务|
  • SUPPORT
技术交流
技术服务 >技术交流

实时荧光定量PCR在手足口病肠道病毒快速检测中的应用

信息来源:中国病原生物学杂志  2008年10月  第3卷第10期

 

    手足口病(hand—foot—mouth disease,HFMD)是由肠道病毒(enterovirus,EV)引起的传染病,多发于婴幼儿,可引起手、足和口腔等部位的疱疹,个别患者还可引起心肌炎、肺水肿和无菌性脑膜炎等并发症。引发手足口病的肠道病毒有20多种(型),柯萨奇病毒A组的16、4、5、9、10型,B组的2、5型以及肠道病毒71型(EV71)均为手足口病较常见的病原体,其中以柯萨奇病毒(Coxsackievirus)A组的16型(Cox A16)和肠道病毒毒EVTl型最为常见。快速而特异地确定病原体,对于手足口病的防控有重要意义。
    RT—PCR目前为肠道病毒感染诊断的重要手段,同时采用实时荧光定量PCR方法对标本进行了平行检测,根据其提供的引物、反应体系和反应条件对送检标本进行了肠道病毒Cox A16和EV71的核酸检测。实时荧光定量PCR法与RT-PCR阳性和阴性符合率均为100%,表明实时荧光定量PCR法特异性与准确性与RT—PCR法相当。与RT-PCR相比,实时荧光定量PCR具有独特的优势和特点:反应和分析在完全闭管的条件下进行,能有效防止PCR产物的污染,提高检测结果的可靠性;试剂在PCR检测仪上进行扩增和分析,无需电泳和紫外灯观测等步骤;从标本处理开始只需要3 h~4 h即可完成检测,节省了检测时间。
   ELISA法快速、经济,应用较为广泛,检测人双份血清标本的中和抗体滴度时通常需用急性期血清与恢复期血清滴度进行比较,抗体滴度≥4倍增高证明病毒感染。由于从病毒感染到抗体出现需要一定时间,因此ELISA法用于疾病的早期诊断灵敏度不高,ELISA法检测118份血清中柯萨奇IgM抗体仅3份阳性,对应病例标本核酸检测22份阳性。显示El,ISA法敏感性较低。荧光定量PCR法具有较高的灵敏度,且无需双份血清就能检测是否存在感染。研究显示,与传统的RT—PCR和ELISA相比,实时荧光定量PCR检测标本快捷,特异性强、灵敏度高,检测手足口病肠道病毒准确高效,值得推广